新闻资讯
全部分类
公司新闻
行业新闻

学会这招从此告别歪歪扭扭Marker

发布时间：

2026-03-12 14:53

这是一个在琼脂糖凝胶电泳中非常常见的问题。Marker条带不直（通常表现为“微笑”条带，即两端向上翘起，或“皱眉”条带，即两端向下弯），通常是由以下几个关键因素造成的。

 

最主要的原因：热量分布不均这是导致条带弯曲，尤其是“微笑”条带（两边向上翘）的头号元凶。

原理：电泳过程中，电流通过凝胶会产生热量。在凝胶的中间部分，热量不易散失，温度较高；而在边缘部分，由于与电泳槽壁接触，热量散失较快，温度较低。

影响：琼脂糖凝胶的迁移率对温度敏感。温度越高，DNA迁移速度越快。因此，凝胶中部的DNA片段因为局部温度高而跑得比两边的快，导致条带中间凸起，形成“微笑”效应。何时容易发生：

  · 电压过高：这是最常见的原因。电压越高，产热越快，温差越大。

  · 电泳缓冲液量过少：缓冲液有助于散热，如果液面刚好覆盖凝胶甚至更少，散热能力会大大下降。

  · 环境温度高：夏天或在温度较高的房间里做实验，问题会更明显。

 

解决方案：

1. 降低电压：尝试将电压从常见的120-150V降低到80-100V，甚至更低。虽然电泳时间会延长，但条带的分辨率和形状会得到显著改善。“慢工出细活”在电泳中非常适用。

2. 保证充足的缓冲液：确保电泳缓冲液（TAE或TBE）完全覆盖凝胶，并有足够的深度（建议高出凝胶表面3-5毫米），以帮助整体散热。

3. 在冷室或冰水浴中电泳：如果条件允许，可以在4℃冷室进行电泳。或者，将整个电泳槽放在一个装有冰水混合物的托盘里进行降温。

 

其他常见原因及解决方案

1. 点样技术问题

问题：

  · 点样力度不均：点样时，有的孔戳得深，有的戳得浅，甚至戳到了孔底，导致样品在孔内起始位置不一致。

  · 戳破凝胶孔底部：如果枪头太尖或用力过猛，戳破了孔底的凝胶，样品就会漏到孔下方，造成条带拖尾和扭曲。

  · 点样速度太快：快速点样会使样品冲入孔中，可能冲击孔壁或造成样品扩散不均匀。

解决方案：

  · 稳定、垂直点样：将微量移液器垂直对准加样孔。

  · 轻柔操作：让枪头尖端刚好在液面下、加样孔的上部，缓慢、平稳地将样品推出。你可以感觉到一个轻微的阻力，说明样品正在被注入孔中，而没有戳到底。

  · 练习：点样是个技术活，多练习才能保持稳定。

 

2. 凝胶制备问题

问题：

  · 琼脂糖凝胶未完全凝固：特别是中间部分凝固不好，强度不够，在电泳时会发生微小变形。

  · 凝胶厚度不均：倒胶时桌面不水平，导致凝胶一边厚一边薄，不同位置的电场强度和迁移速率不同。

  · 加样孔损坏：拔梳子时用力过猛或速度太快，撕裂了加样孔的底部或边缘。

解决方案：

  · 充分凝固：确保凝胶完全凝固（通常室温下30-45分钟），用手触摸盛胶托盘底部感到凉意，说明凝固好了。

  · 水平放置：在倒胶和凝固过程中，确保制胶平台处于准确的水平状态。

  · 小心拔梳：垂直向上、缓慢而平稳地拔出梳子。拔之前可以在凝胶和梳子接口处滴加少量电泳缓冲液润滑。

 

3. 电泳装置问题

问题：

  · 电极不平衡：电泳槽使用久了，正负两极的铂金丝可能变得不平整，导致凝胶不同区域的电场强度不均匀。

  · 缓冲液盐浓度不均：如果电泳前没有在凝胶上方加入缓冲液，或者加入后没有混匀，会导致离子强度不均，影响电场分布。

解决方案：

  · 检查电泳槽：观察一下电泳槽两端的铂金丝是否在同一水平线上。

  · 正确添加缓冲液：倒入足量缓冲液覆盖凝胶后，可以轻轻晃动电泳槽，或者用移液器吹打几下，使缓冲液盐浓度均一。

 

4. 样品本身问题

问题：

  · 盐浓度过高：如果你的样品溶解在含有高浓度盐的溶液中（如未脱盐的酶切产物），其导电性会远高于Marker，导致该孔道电场强度异常，条带扭曲或跑得快。

  · 上样量过大：过多的DNA会导致条带过宽、拖尾，在边缘孔道可能因为扩散空间受限而显得不直。

解决方案：

  · 纯化样品：对样品进行乙醇沉淀或使用纯化柱去除多余的盐分。

  · 减少上样量：在保证能看清的前提下，适当减少DNA的上样体积或质量。

推荐新闻