磁珠法核酸提取过程中常见的误区有哪些

发布时间:

2023-12-13 09:12

磁珠法核酸提取过程中常见的误区有哪些

使用生物磁珠法提取核酸,在国内还属于较为新颖的核酸提取方式,相比于传统的氯仿异戊醇抽提法和离心柱试剂盒法,这种方法还有很多人不甚了解,在使用磁珠法提纯核酸的过程中,也存在着一些误区。

误区一:磁珠使用越多,提取效果越好

提取效果不佳时,实验人员会考虑增加磁珠的用量,认为磁珠多加一点,可以吸附更多的核酸,这种想法是不可取的。

磁珠的主要特点是既可以分散于液体中,也可以在外加磁场作用下使固液相分离,任何试剂体系,磁珠和液体的比例都应该是有一定阈值的,超过一定的比例,过多的磁珠将因为无法均匀分散于液体中,而丧失其分散的特性,也使得洗涤过程中无法充分增加核酸磁珠和液体接触的效率。而过量的磁珠也会吸附更多的杂质,对于除杂的效果影响非常大。甚至有些时候,过多的磁珠会吸附蛋白酶、溶菌酶等在液体体系中起主要作用的功能成分,导致整个试剂盒效率低下。有很多时候,在提取效果不佳的时候,减少磁珠使用量,反而是提升提取效果的途径。

误区二:试剂使用的越多,提取效果越好

裂解效果不好?增加裂解液使用量。这是很多客户在使用试剂盒中的惯性思维但是对于磁珠法而言,每增加一部分液体体积,减少了更多的磁珠碰撞几率,而降低磁珠碰撞几率,会导致吸附率的大幅度下降。所以很多时候,虽然增加裂解液和洗涤液确实能够起到增强裂解和增强洗涤的作用,但磁珠法提取的核心是磁珠吸附核酸的效率,无法保证磁珠碰撞效率是不能保证核酸提取效率的,所以单纯增加试剂使用量改善提取效果并不一定完全有效。

误区三:洗涤次数越多,提取效果越好

提取得到的核酸杂质过多时,使用者会考虑多进行几次洗涤,以得到更为纯净的核酸。增加洗涤次数确实有利于提纯核酸,但考虑到每次洗涤都会损失一定量的核酸,且增加了核酸断裂的可能性,所以一般来说洗涤次数控制在2~4次为宜。

误区四:样本取用的越多,提取效果越好

在样本不够新鲜或者核酸含量本身很少的情况下,往往核酸提取效果不好,会采用多取样本的方式增加核酸提取量。但简单地增加样本取样量,有时会引入过多的杂质,超出裂解液裂解能力,也会使提取效率降低,所以并不推荐通过简单的增加样本取样量的方式来达到增加提取量的目的。

如果确实是由于样本量不足而引起的提取量过低,建议在前处理先经过富集或者浓缩步骤再开始提取或者增加裂解的完全性,使更多的核酸暴露出来也是一种解决方法。

误区五:某一种磁珠好,应该在所有实验中效果都好

磁珠的种类是多种多样的,粒径大小不同,分散性不同,磁响应时间不同,包被基础基质不同,外层修饰官能团不同,包被密度不同,官能团臂长不同,会导致磁珠特性千差万别所以不同磁珠所适应的实验和体系也是不同的。像同样是核酸提取的试剂,配方也并不完全相同,同样应用于核酸提取的磁珠,性质也并非完全一致。

有的磁珠在常量核酸提取中表现出了更高的吸附效率,有的磁珠更适用于微量核酸提取有的磁珠适合偏酸性系列的试剂体系,有的磁珠适合偏碱性系列的试剂体系有的磁珠磁响应性好但是沉降速度快有的磁珠沉降速度慢但是磁响应时间长。很少有一种磁珠能适用于所有实验的情况,除了固定的试剂盒配合,多数情况下,磁珠和试剂体系都要做一定时间的配合调整。

误区六:和某种试剂盒对比效果不好,是磁珠不好

很多客户在筛选磁珠过程中都是在已经成熟试剂体系下,简单地等量替换磁珠,用于比较磁珠效果。这样会很容易得出某种磁珠效果不好的结论,但实际上,由于不同磁珠适合的体系和用量是不同的,往往需要调整过后才能获得更好的提取效果。

上海领骏生物科技有限公司成立于2016年,位于上海市青浦区张江云立方园区。公司长期致力于生物领域内相关产品的研发、生产和销售,产品主要包括磁性纳米材料和磁珠法核酸提取纯化试剂。公司一直坚持以质量、诚信、团结、奋进为宗旨,严格规范质量管理体系,持续创新、精益求精,为客户提供优质的产品和服务,被认定为高新技术企业和上海市专精特新企业。

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